載體
載體:zài tǐ
英文單詞vector ,在基因工程重組DNA技術(shù)中將DNA片段(目的基因)轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的一種能自我復(fù)制的DNA分子。三種最常用的載體是細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體和動(dòng)植物病毒。
運(yùn)載體
在基因操作過程中使用運(yùn)載體有兩個(gè)目的:一是用它作為運(yùn)載工具,將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中去;二是利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量的復(fù)制(稱為克隆)?,F(xiàn)在所用的運(yùn)載體主要有兩類:一類是細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)的質(zhì)粒,它是一種相對(duì)分子質(zhì)量較小、獨(dú)立于染色體DNA之外的環(huán)狀DNA(一般有1~200 kb左右,kb為千堿基對(duì)),有的一個(gè)細(xì)菌中有一個(gè),有的一個(gè)細(xì)菌中有多個(gè)。質(zhì)粒能通過細(xì)菌間的接合由一個(gè)細(xì)菌向另一個(gè)細(xì)菌轉(zhuǎn)移,可以獨(dú)立復(fù)制,也可整合到細(xì)菌染色體DNA中,隨著染色體DNA的復(fù)制而復(fù)制。另一類運(yùn)載體是噬菌體或某些病毒等?,F(xiàn)在人們還在不斷尋找新的運(yùn)載體,如葉綠體或線粒體DNA等也有可能成為運(yùn)載體。
作為運(yùn)載體必須具有四個(gè)條件:①在宿主細(xì)胞中能保存下來并能大量復(fù)制;②有多個(gè)限制酶切點(diǎn),而且每種酶的切點(diǎn)最好只有一個(gè),如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識(shí)別位點(diǎn),可適于多種限制酶切割的DNA插入;③ 含有復(fù)制起始位點(diǎn),能夠獨(dú)立復(fù)制;④有一定的標(biāo)記基因,便于進(jìn)行篩選。如大腸桿菌的pBR322質(zhì)粒攜帶氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因,就可以作為篩選的標(biāo)記基因。一般來說,天然運(yùn)載體往往不能滿足上述要求,因此需要根據(jù)不同的目的和需要,對(duì)運(yùn)載體進(jìn)行人工改建?,F(xiàn)在所使用的質(zhì)粒載體幾乎都是經(jīng)過改建的?!?br />
基因克隆的載體類型:質(zhì)粒載體,噬菌體載體,柯斯質(zhì)粒載體,M13噬菌體載體,噬菌粒載體
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